Prosedur Pemeriksaan D-Dimer

   Spesimen yang diperlukan untuk pengukuran D-dimer adalah plasma citrat 9:1. Kumpulkan darah vena dalam tabung bertutup biru (mengandung Na. citrat). Cegah jangan sampai hemolisis; campur spesimen dengan lembut dengan membolak-balikkan tabung secara perlahan, tabung jangan dikocok. Spesimen dipusingkan selama 15 menit pada 4000 rpm. Pisahkan plasmanya.

Tujuan : untuk menentukan produk degradasi fibrin pada plasma manusia dengan menggunakan tes aglutinasi latex.

Bahan Pemeriksaan : Plasma sitrat. Spesimen harus terbebas dari kontaminasi mikrobial. Stabil selama 4 jam pada suhu kamar dan 8 jam pada suhu 2-80C serta 1 bulan pada -200C.

Reagen :

- Suspensi latex

- Cairan buffer

- Kontrol positif (dengan menambahkan 0,5 aquadest dalam tiap vial kontrol).

- Kontrol negatif (dengan menambahkan 0,5 aquadest dalam tiap vial kontrol).

- Semua reagen bila tidak digunakan disimpan disimpan pada suhu 2-80C.

- Reagen dan sampel harus disimpan pada suhu kamar.

- Sebelum tes, kemudian dapat disimpan kembali pada refrigerator.

A. Pemeriksaan D-Dimer Secara Manual

Metode : Manual

Prinsip : Fibrinosticon adalah suatu tes aglutinasi latex immunologik yang menggunakan partikel latex yang dilapisi antibodi monoklonal yang spesifik untuk cross-linked D-dimer pada fibrin.

Alat dan Bahan :

- Tabung reaksi

- Pipet 20 µL, 100 µL

- Batang pengaduk

Cara Kerja :

Siapkan 2 tabung yang bersih dan beri label “tanpa pengenceran” dan ”pengenceran 1:2”

1. Pipet 100 µL sampel pada kedua tabung

2. Pipet 100 µL larutan buffer pada tabung kedua untuk membuat pengenceran 1:2

3. Pipet 20 µL kontrol (+) dan kontrol (-) pada kedua daerah tes mixing slide, juga pipet 20 µL plasma yang tidak diencerkan dan yang telah diencerkan pada 2 daerah tes yang lain

4. Pipet 20 µL suspensi latex pada masing-masing daerah tes, kemudian campur dengan batang pengaduk dan digoyang selama 2 menit.

5. Lihat aglutinasi secara mikroskopis dan catat hasilnya, dan bandingkan dengan kontrol (+) dan kontrol (-) 

Catatan :

Kontrol (-) akan terlihat keabu-abuan (homogen)

Kontrol (+) akan terlihat adanya aglutinasi

Bila belum didapatkan hasil (-), maka pengukuran D-dimer secara semi-kuantitatif dapat dihitung sacara serial dengan cara pengenceran beberapa kali (faktor pengenceran –d), sampai hasil (-).

Interpretasi :

Hasil tes Sampel	D-dimer
tanpa pengenceran (-) tanpa pengenceran (+) dan pengenceran 1:2 (-) pengenceran 1:2 (+)	< 500 ng/mL 500-1000  ng/mL >.1000 ng/mL

Perhitungan semi-kuantitif :

Perhitungan dibuat dengan mengalirkan faktor pengenceran (d) yang terbesar dengan hasil (+) yang masih terdeteksi dengan 500 ng/mL

D-dimer = 500 x d

Nilai normal : < 500

Pustaka acuan : Manual Book Fibrinostikon/D-dimer (Organon teknika)

B. Perhitungan D-dimer secara Kuantitatif

Nama Alat : NycoCard Reader II

Preparasi Sampel :

Darah sitrat (1:9) putar pada centrifuge 4000 rpm selama 15 menit supaya bisa meresap, bila kurang dari 4000 rpm sampel tidak bisa meresap.

Catatan Penting :

- Jangan menukar reagen dari kit batch yang berbeda

- Reagen dan sampel harus sama dengan suhu ruangan (20-250C)

- Prosedur test harus dikerjakan berurutan tanpa penundaan

- Sampel plasma yang beku harus dicairkan di waterbath dengan temperatur 370C selama 15 menit

Cara Kerja :

1. Tambahkan 50 µL washing solution (R2) kedalam lubang test. Biarkan meresap. (Jangan menyentuh lubang test dengan pipet atau jari, hati-hati menambahkan R2 jangan sampai luber. Bila luber, bersihkan cairan di sekeliling lubang dengan tissue).

2. Tambahkan 50 µL sample atau control (C) ke dalam lubang test. Biarkan meresap. (Sampel harus meresap kurang dari 45 detik).

3. Kocok conjugate (R1), tambahkan 50 µL ke dalam lubang test, biarkan meresap. (Conjugate harus meresap kurang dari 45 detik).

4. Tambahkan 50 µL washing solution (R2) ke dalam lubang test. Biarkan meresap. (Jangan menyentuh lubang test dengan pipet atau jari, hati-hati menambahkan R2 jangan sampai luber. Bila luber, bersihkan cairan di sekeliling lubang dengan tissue).

5. Baca hasil dengan menggunakan NycoCard Reader II. (Instrument harus dikalibrasi sebelum digunakan. Gunakan menu D-dimer. Baca hasil dalam 2 menit).

Hasil normal : negatif atau kurang dari 300 ng/ml