Prosedur Pemeriksaan Kreatinin

Pada tulisan sebelumnya, saya telah menjelaskan tentang peranan kreatinin. Mengingat perannya cukup penting maka saya akan mencoba memberikan gambaran pemeriksaan kreatinin yang biasa dilakukan di laboratorium.
Penentuan kreatinin serum bisanya menggunakan metode Jaffe. Metode Jaffe dapat dilakukan dengan deproteinisasi maupun tanpa deproteinisasi. Maksud dari deproteinisasi adalah sebelum melakukan pemeriksaan, protein dalam sampel dipisahkan dahulu.
Beberapa perbedaan antara pemeriksaan protein deproteinisasi dengan tanpa denproteinisasi
Deproteinisasi
1. Penggunaan asam pikrat dan NaOH secara terpisah
2. Pembacaan secara fotometris menggunakan cara end point
3. Mudah dipengaruhi oleh warna serum
4. Urutan pengerjaan menjadi lebih panjang karena melakukan centrifuge untuk memisahkan endapan protein
Tanpa deproteinisasi
1. Asam pikrat dan NaOH dicampur sebelum ditambah sampel
2. Pembacaan secara fotometris menggunakan cara Fixed time
3. Hasil serum /plasma harus dikoreksi dengan 0.3 mg/dl
Untuk kali ini saya akan menjelaskan metode Jaffe tanpa deproteinisasi menggunakan reagen produksi Biocon

Prinsip pemeriksaan kreatinin
Dalam suasana alkalis, kreatinin bila ditambag asam pikrat akan membentuk suatu warna komplek yang berwarna kuning-orange. Intensitas warna sebanding dengan kansentrasi dan dapat diukur secara fotometri. Penentuan secara fixed time kinetik dapat meminimalisir pengaruh billirubin dalam sampel.

Komposisi reagen
Reagen 1 (R1) : Mengandung asam pikrat konsentrasi 35 mmol/l
Reagen 2 (R2) : Natrium Hidroksida (NaOH) konsentrasi 0.32 mmol/l
Reagen 4 (R4) : Standar kreatinin konsentrasi 2 mg/dl

Persiapan den stabilitas
Encerkan 1 bagian R1 dengan 1 bagian R2. Campuran reagen tersebut stabil selama 10 hari pada temperatur 2-8C atau 1 hari pada temperatur 20-25C
Sampel
Serum, Plasma heparin atau EDTA. Stabil selama 7 hari pada temperatur 2-8c
Urin. Diencerkan 50 kali. Stabil 4 hari pada temperatur 2-8c

Batasan
Ikterus : Tidak ada pengaruh signifikan sampai kadar billirubin mencapai 10 mg/dl
Hemolisis : Tidak ada pengaruh signifikan sampai kadar Hb mencapai 1.1 gr%
Lipemia : Tidak ada pengaruh signifikan sampai kadar Trigliserida mencapai 2.148 mg/dl

Prosedur
Panjang gelombang : 492 nm (480-520 nm)
Temperatur : 25/30/37c
Blanko : Udara atau aquadest
Karena reaksi sangat sensitif terhadap temperatur, maka reagensia harus di pra-inkubasikan dahulu pada suhu konstan (pada umumnya 10 menit)

Untuk pengerjaan standar:
50 ul R4 + 500 ul Reagen kerja, campur. Setelah tepat 20 detik ukur A1st. Kemudian setelah 80 detik setelah pembacaan A1st, ukur A2st. Hitung selisih A1st dan A2st sebagai Ast

Untuk pengerjaan sampel:
50 ul sampel + 500 ul Reagen kerja, campur. Setelah tepat 20 detik ukur A1sp. Kemudian setelah 80 detik setelah pembacaan A1sp, ukur A2sp. Hitung selisih A1sp dan A2sp sebagai Asp

Kalkulasi
Kreatinin serum (mg/dl) = [Asp:Ast]x2.0 mg/dl
Kreatinin urin (mg/dl) = [Asp:Ast]x100mg/dl
Kreatinin urin 24 jam (mg/24jam) = Kreatinin urin (mg/dl) x vol urin 24 jam (dl)

Batas pengukuran
Serum / plasma = 0.1-10 mg/dl
Urin = 0.1-200 mg/dl
Bila melampaui batas tersebut diatas, encerkan sampel 1+1 dengan NaCl dan ulangi test. Kalikan hasil yang didapat dengan 2

Nilai Normal
Serum/plasma pria = 0.7-1.2mg/dl
Serum/plasma wanita = 1.5-0.9mg/dl
Urin Pria = 39-259mg/dl
Urin wanita = 28-217mg/dl

Sensitifitas
Limit deteksi = 0.1mg/dl
Limit deteksi terendah menunjukan konsentrasi terendah yang dapat diukur yang dapat dibedakan dari nol